Rychlý test adenoviru – nosní sekrece

Zamýšlené použití:

Sada SARS-CoV{1}} Nucleic Acid Test se používá ke kvalitativní detekci nukleové kyseliny COVID-19 ve výtěrech z nosohltanu, orofaryngeálních výtěrech a sputu. Výsledky testů poskytují základ molekulární diagnózy pro infekci nebo suspektní pacienty a neměly by být používány jako jediné kritérium pro klinickou diagnózu.

materiály:

Postup testu:

A. Příprava vzorku

Extrahovaná RNA je výchozím materiálem pro sadu SARS-CoV-2 Nucleic Acid Test.

Důležité: Každý postup extrakce nukleové kyseliny musí být proveden současně s jednou pozitivní kontrolou (40 μl, nařeďte sterilními fyziologickými roztoky/PBS na požadovaný objem) a jednou negativní kontrolou (40 μl, zřeďte sterilními fyziologickými roztoky/PBS na požadovaný objem).

Doporučuje se používat následující komerční soupravy pro extrakci nukleových kyselin: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Nastavení reakční směsi

1. Všechny reagencie a vzorky by měly být před použitím zcela rozmraženy, zcela promíchány a krátce odstředěny při pokojové teplotě (přibližný rozsah 18 až 25 stupňů).

2. Připravte požadovaný objem reakční směsi v polypropylenové mikrocentrifugační zkumavce odpovídající velikosti.

3. Napipetujte 25 µl reakční směsi do každé požadované jamky vhodné optické 96-jamkové reakční destičky nebo vhodné optické reakční zkumavky.

C. Přidání šablony

1. Přidejte 5 μl extrahované RNA ze vzorků/pozitivní kontroly/negativní kontroly. Celkový objem je 30 μL.

2. Důkladně promíchejte vzorky a kontroly s reakční směsí pipetováním nahoru a dolů/vířením.

3. Uzavřete 96-jamkovou reakční destičku vhodnými víčky nebo optickou lepicí fólií a reakční zkumavky vhodnými víčky.

4. Centrifugujte 96-jamkovou reakční destičku v centrifuze s rotorem mikrotitrační destičky po dobu 30 sekund při přibližně 2500 ot./min.

D. Programování přístroje Real-Time PCR

Základní informace týkající se nastavení a programování různých přístrojů real-time PCR najdete v uživatelské příručce příslušného přístroje. Test byl optimalizován pro systém ABI7500 Real-Time PCR. Běh PCR se provádí za podmínek cyklování, jak je popsáno v tabulce níže.

Definujte fluorescenční detektory

*Nastavte prosím vnitřní fluorescenční referenci přístroje na "None", například: Pro přístroje řady ABI nastavte "Passive Reference" na "None".

E. Analýza dat

Nastavte parametry analýzy a analyzujte data podle návodu k obsluze příslušných přístrojů.

Vezměte si ABI 7500 jako příklad:

Základní čára by měla být nastavena na rozsah, který eliminuje fluorescenci pozadí zjištěnou v prvních cyklech amplifikace, ale který nepřekrývá oblast, kde signály amplifikace stoupají nad pozadí (počáteční hodnota: 3~10; Koncová hodnota: {{2} }). Prahová hodnota cyklu (Ct) by měla být v základu exponenciální fáze. Klikněte na "Analýza" pro automatické získání výsledku analýzy a přečtěte si výsledek detekce v okně "Report".

Populární Tagy: adenovirus rychlý test - nosní sekrece, Čína, dodavatelé, výrobci, továrna, hromadně